化學藥物中亞硝胺類雜質(zhì)研究技術指導原則

（征求意見稿）

一、概述

自2018年7月在纈沙坦原料藥中檢出N-亞硝基二甲胺（NDMA）起，陸續(xù)在其它沙坦類原料藥中檢出了各類亞硝胺雜質(zhì)，如NDMA、N-亞硝基二乙胺（NDEA）等。進一步的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在個別供應商的非沙坦類的藥物中（如雷尼替?。?，亦有亞硝胺類雜質(zhì)的檢出。亞硝胺類雜質(zhì)屬于ICH M7（R1）（《評估和控制藥物中DNA反應性（致突變）雜質(zhì)以限制潛在致癌風險》）指南【1】中提及的“關注隊列”物質(zhì)；其中根據(jù)世界衛(wèi)生組織公布的致癌物清單【2】，NDMA和NDEA均屬于2A類致癌物質(zhì)；根據(jù)CPDB（Carcinogenicity Potency Database）數(shù)據(jù)庫，已有部分亞硝胺類雜質(zhì)有公開的致癌性數(shù)據(jù)，如NDMA、NDEA、N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）、N-亞硝基二丁胺（NDBA）等。

為了保證藥品的安全和質(zhì)量可控，實現(xiàn)有效的風險控制，特制定本技術指導原則，旨在為注冊申請上市以及已上市化學藥品中亞硝胺類雜質(zhì)的研究和控制提供指導。

申請人應切實履行藥品質(zhì)量管理的主體責任，對藥品的安全和質(zhì)量進行全生命周期管理，盡可能的避免亞硝胺類雜質(zhì)的引入，若確不能完全避免的，應充分評估藥品中亞硝胺類雜質(zhì)的風險，并將亞硝胺類雜質(zhì)控制在安全限度以下。

二、亞硝胺類雜質(zhì)產(chǎn)生的原因

根據(jù)目前所知，亞硝胺類雜質(zhì)有多種產(chǎn)生原因【3】，如工藝產(chǎn)生、降解途徑和污染引入等。具體來講，亞硝胺類雜質(zhì)可能通過以下途徑引入【4】：

（一）由工藝引入亞硝胺類雜質(zhì)的風險

目前所知，NDMA、NDEA雜質(zhì)可能通過亞硝化機理生成。即在一定條件下，胺類化合物尤其是仲胺，與亞硝酸鈉（NaNO2）或其它亞硝化試劑反應產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)。

在同一工藝步驟中使用了能引入仲胺和亞硝酸鹽類的物料（包括起始物料、溶劑、試劑、催化劑、中間體等），有較高的風險引入亞硝胺類雜質(zhì)；即使在不同的工藝步驟中分別使用能引入仲胺和亞硝酸鹽類的物料，也可能會產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)。

除物料本身帶有仲胺結(jié)構(gòu)外，仲胺可能的來源有：伯胺、叔胺及季銨可能引入仲胺雜質(zhì)；酰胺類溶劑（如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等）在適宜的條件下（如：酸性，高溫等）可能產(chǎn)生仲胺。

亞硝化試劑可能引入來源有：亞硝酸鹽、亞硝酸酯、亞硝酸、由亞硝酸鹽制備的物質(zhì)（如:疊氮化鈉等），胺類化合物的氧化等。

當條件具備時，在制劑的生產(chǎn)或儲存過程中也可能產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)。

（二）由污染引入的風險

原料藥生產(chǎn)過程中使用了被亞硝胺類雜質(zhì)污染的物料（起始物料、中間體、溶劑、試劑、催化劑等）可能帶來亞硝胺類雜質(zhì)的風險。

使用回收的物料亦有引入亞硝胺類雜質(zhì)的風險。已發(fā)現(xiàn)的回收物料被亞硝胺污染的實例包括鄰二甲苯、氯化三丁基錫（用作疊氮化三丁基錫的來源）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。

在同一生產(chǎn)線生產(chǎn)不同的品種，由于清潔不徹底，造成的交叉污染。

（三）降解產(chǎn)生風險

某些藥物本身會降解產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)，如雷尼替丁在高溫下會產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)。

三、控制策略

（一）基本控制理念

由于亞硝胺類雜質(zhì)在人體中可接受限度較小，微量雜質(zhì)的檢測和控制難度大。因此對于亞硝胺類雜質(zhì)的控制應采取避免為主，控制為輔的策略。

避免為主是指在藥品的研發(fā)階段應根據(jù)亞硝胺類雜質(zhì)產(chǎn)生的原因從原料藥工藝路線的選擇、物料的選擇與質(zhì)控、工藝條件的優(yōu)化等方面盡量避免亞硝胺類雜質(zhì)的產(chǎn)生，并在生產(chǎn)過程中嚴格執(zhí)行各操作規(guī)范。藥品生產(chǎn)企業(yè)應與各物料（原料藥應包括起始物料、溶劑、試劑、催化劑、中間體等，制劑應包括原料藥、輔料、包材等等）生產(chǎn)商充分溝通，對物料生產(chǎn)和回收工藝進行系統(tǒng)評估。風險評估方法可以采用ICH Q9（《質(zhì)量風險管理》）中所述的FMEA（Failure Mode Effects Analysis）或FMECA（Failure Mode, Effects and Criticality Analysis）【5】，或其它科學合理的方法。

若評估發(fā)現(xiàn)有生成亞硝胺類雜質(zhì)的風險，應首先分析亞硝酸鹽，以及可能形成亞硝胺類雜質(zhì)的相關試劑和溶劑在工藝中使用的必要性，盡量避免選擇可能生成亞硝胺類雜質(zhì)的生產(chǎn)工藝【6】。

控制為輔的策略是指當評估藥品具有亞硝胺類雜質(zhì)殘留風險且相關工藝無法避免時，應盡可能將該步驟調(diào)整至工藝的早期，利用后續(xù)多步驟的操作降低亞硝胺類雜質(zhì)殘留風險。同時須根據(jù)工藝路線分析可能生成的亞硝胺結(jié)構(gòu)，并優(yōu)化工藝，制定詳細的過程控制策略，保證生產(chǎn)過程中此類雜質(zhì)的有效去除。

由降解產(chǎn)生亞硝胺類雜質(zhì)的情況，應分析降解產(chǎn)生的條件，通過優(yōu)化生產(chǎn)工藝、處方、貯存條件等，降低降解雜質(zhì)的產(chǎn)生風險。

對于明確有亞硝胺類雜質(zhì)殘留風險的品種應建立合適的分析方法，確保成品中亞硝胺類雜質(zhì)低于限度要求。

（二）限度控制

藥物中亞硝胺類雜質(zhì)的控制策略建議參考ICH M7（R1）指南的相關規(guī)定，應保證最終擬定的控制策略和雜質(zhì)限度具有充分合理的科學依據(jù)。亞硝胺類雜質(zhì)的致癌風險較高，僅按照ICH M7（R1）提出的1.5μg/天的毒理學關注閾值（TTC）尚不足以充分控制風險。

申請人應根據(jù)研發(fā)品種的物料屬性、工藝路線、生產(chǎn)過程、降解情況、分析測試結(jié)果、監(jiān)管機構(gòu)的要求確定應該控制的亞硝胺類雜質(zhì)種類。國際癌癥研究機構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，簡稱IARC）將亞硝胺類雜質(zhì)列為2A類致癌物（對人可能致癌，但證據(jù)有限，對實驗動物致癌性證據(jù)充分），ICH M7（R1）規(guī)定屬于Ⅰ類致突變雜質(zhì)，因此，藥物中亞硝胺類雜質(zhì)的控制應在符合ICH M7（R1）要求基礎上制訂控制策略，以使該類雜質(zhì)在原料藥和制劑中的水平低于可接受限度。

1.能在權威機構(gòu)數(shù)據(jù)庫中查找到TD50值（50%腫瘤發(fā)生率）的亞硝胺類雜質(zhì)

物質(zhì)的TD50一般來源于CPDB等權威機構(gòu)數(shù)據(jù)庫。

亞硝胺類雜質(zhì)致癌風險高，首先應查找其最敏感物種和對誘導最敏感的腫瘤發(fā)生部位產(chǎn)生的TD50值（或者選擇更為保守或安全系數(shù)更高的動物種屬的TD50值），

設定對應腫瘤發(fā)生風險為十萬分之一，人體體重統(tǒng)一按50kg計算，則該亞硝胺類雜質(zhì)的每日可接受攝入量（Acceptable Intake，AI）為：TD50（mg/kg/天） ×50kg/50000。

結(jié)合各藥品法定說明書中規(guī)定的每日最大用藥量，可計算出該藥品中亞硝胺類雜質(zhì)的控制限度。計算公式為：

限度=AI/每日用藥量。

具體可參考本文所附示例1。

2.未在權威機構(gòu)數(shù)據(jù)庫中查見TD50值的亞硝胺類雜質(zhì)

未能在權威機構(gòu)數(shù)據(jù)庫中查詢到TD50值時，可選用以下幾種方法分別獲得該亞硝胺類雜質(zhì)的控制限度，并建議取其中最小值：

A.可以參考國際權威機構(gòu)，如WHO、國際化學品安全性方案（International Programme on Chemical Safety，IPCS）等公布的數(shù)據(jù)或建立的風險評估方法。

B.與已有TD50值的亞硝胺類雜質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，可以導用其TD50值計算雜質(zhì)限度。如示例2。

（三）檢測方法的建立

藥物中亞硝胺類雜質(zhì)的分析測試方法，可以參考權威機構(gòu)發(fā)布的方法，亦可自行開發(fā)方法，均需注意分析方法靈敏度應與所論證的雜質(zhì)限度相匹配，并采用雜質(zhì)對照品進行完整的方法學驗證，保證亞硝胺類雜質(zhì)能夠準確有效的檢出。若企業(yè)采用自行開發(fā)方法，需證明該方法等效于或者更優(yōu)于同品種官方公布的方法。

（四）全生命周期的風險控制

對于申報上市的產(chǎn)品，申請人在研發(fā)中，應進行亞硝胺類雜質(zhì)的風險評估，對明確有亞硝胺類雜質(zhì)潛在風險的品種應進行充分的研究，在申報資料的相應章節(jié)提交亞硝胺類雜質(zhì)的研究資料及檢測結(jié)果，同時應注意用于研究的樣品的批次、批量必須具有代表性以及科學依據(jù)。

對于已上市藥品，藥品批準文號持有者/生產(chǎn)廠也應主動對于亞硝胺類雜質(zhì)存在的風險進行評估，若存在潛在的亞硝胺類雜質(zhì)產(chǎn)生風險，可參照本指導原則以及其他相關指導原則的要求進行研究，根據(jù)研究結(jié)果采取相應的措施，以防止或最小化患者亞硝胺類雜質(zhì)的暴露。

四、其他

NDMA是一種常見亞硝胺類物質(zhì)，在水中和食物中，包括熏肉和烤肉、奶制品和蔬菜中均有發(fā)現(xiàn)。所有人均會暴露于一定水平的NDMA。FDA和國際科學團體并不認為攝入低水平會導致傷害。NDMA在美國的可接受攝入限度為96ng。長期暴露于高出可接受水平的基因毒性物質(zhì)如NDMA可能會增加患癌風險，但持續(xù)70年每天服用含有等于或低于可接受水平NDMA的藥品的人并不會增加患癌風險?！?】

目前各國藥品監(jiān)管機構(gòu)正在對藥品中的亞硝胺類雜質(zhì)積極開展相應的探索研究，本指導原則將基于各方研究結(jié)果及風險效益評估原則不斷完善。

五、附件

示例1：有權威機構(gòu)推薦的TD50值的亞硝胺類雜質(zhì)的限度

一般來說，對于具有陽性致癌數(shù)據(jù)的誘變雜質(zhì)，建議根據(jù)CPDB（Carcinogenicity Potency Database）數(shù)據(jù)庫中致癌性物質(zhì)的TD50值來計算每日可接受的攝入量（AI）。NDMA在小鼠與大鼠的TD50值分別為0.189mg/kg/天和0.0959mg/kg/天。按照更為保守的大鼠TD50值0.0959mg/kg/天和人體重50kg來計算人對NDMA的每日最大攝入量為：0.0959mg/kg/天×50kg/50000 =0.0000959mg/天≈96ng/天，此時對應腫瘤發(fā)生風險為十萬分之一。

若按照纈沙坦每日最大用藥320mg計算，則其NDMA限度設定為：

96ng /320mg=0.00003%=0.30ppm。

示例2：未在權威機構(gòu)數(shù)據(jù)庫中查見TD50值的亞硝胺類雜質(zhì)的限度【7b】

CPDB數(shù)據(jù)庫中暫無DIPNA和EIPNA的TD50數(shù)據(jù)，根據(jù)ICH M7（R1）中第7.5章中建議的方法，可以結(jié)合具體案例，使用結(jié)構(gòu)與當前化合物密切相關的其他化合物的致癌性數(shù)據(jù)作為當前化合物的致癌性數(shù)據(jù)。為了確證密切相關的結(jié)構(gòu)，基于SAR分析的結(jié)果以及該類化合物均可以形成烷基重氮離子的特性，認為NDEA的致癌性數(shù)據(jù)可以用于DIPNA以及EIPNA的AI值計算。根據(jù)Sulc等人（2010年）的研究結(jié)果，烷基N-亞硝胺可以在生物體內(nèi)通過α-羥基化過程轉(zhuǎn)化成相應的可以導致DNA共價修飾的烷基重氮離子，并同時釋放羰基化合物。

根據(jù)纈沙坦每日用藥量和用藥周期，參考示例1的計算方法，可以得出DIPNA、EIPNA的人每日最大攝入量為26.5ng/天，此時對應腫瘤發(fā)生風險為十萬分之一。